荧光显微镜的光学系统必须完成两个主要功能
2012-07-23
荧光的光学系统必须完成两个主要功能：
(1)要有效的激发试样中荧光反应物，使用的发射波长最好接近它的吸收峰：
(2)必须尽可能呢个多的收集发出的荧光，以便使显微镜内可见度最合适。
荧光光学系统的成象质量主要取决于象的衬度和象的亮度，象的衬度是由样品中激发出的荧光于背景上观察到的光之比决定的。背景光包括透过阻挡激发光的滤色片的杂散激发光，样品组织成分的自发荧光和光学系统的自发荧光和杂散光，荧光显微术中尽全力要解决的是一方面获得最佳的象衬度，同时又维持象有足够亮度，这两者往往是矛盾的。例如用极窄波带滤色片激发时仅利用了极少的光能，背景暗了但荧光亮度也弱了。在应用时，只能兼顾，合理的权衡以决定取舍。
荧光显微镜光学系统需要优先考虑的是：
1. 光学系统造成的材料应选用在激发光波内无荧光材料，不但指光学系统玻璃也包括胶合制造中的胶合剂、切片、盖玻片和浸液以及密封剂。若有自发荧光时，被单增加背景光，有时还会混扰观察荧光图象。
2. 光学系统的参数选择中，应将获得最大光能作为第一考虑因素。
如照明系统中集光镜应选用最大的包容角;采用科勒照明并使灯丝或弧光象充满入瞳.....以期望获得高效率的均匀照明。
如收集荧光成像的物镜，因为象面照度与数值孔径成正比，为此作为荧光用物镜应有较大的值。
如双目镜筒作为荧光用时应在可见光谱段有较高的透过率，采用镀膜技术可大大地减少光能的损失，它可比一般双目镜筒透过率提高一倍，这对弱荧光物质观察是必需的。
3. 作为荧光光学系统各组成部件的光谱特性也是至关重要的，特别紫外光要通过的部件如照明系统，聚光镜以及物镜，就要关注紫光区的透射系数。如聚光镜材质要选用透紫外线制造。如照明系统中反光镜转折光路时，表面镀铝比镀银好，因为铝的反射率在90%以上，而银仅达70%
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